獸藥殘留查驗方式
- 時候：2015-09-19 來歷：迅達康
最近幾年來,跟著獸藥的品種和操縱規模劇增，出格是抗生素在畜牧出產中的操縱增添,由此致使的植物性食物中獸藥殘留題目日趨凸起人們對獸藥殘留題目也日趨存眷。獸藥殘留闡發是龐雜夾雜物中痕量組分的闡發手藝。殘留闡發既須要邃密的微量操縱手腕,又須要高活絡的痕量檢測手藝,難度大、儀器化程度和闡發本錢高,闡發品質節制和闡發戰略(如挑選性闡發、確證性闡發)有出格請求。現對獸藥殘留闡發平分手和檢測手藝近況及成長意向做一扼要先容。
1 樣本前處置
1. 1 提取
提取是操縱恰當溶劑將待測物連同局部樣本基質從固態樣本轉至易于污染或闡發的液態,凡是可撤除99%的樣本雜質。按照樣本的性子挑選溶劑,如脂肪或水份含量。操縱水溶性無機溶劑(乙腈、甲醇、丙酮等)有很多長處:溶劑和植物樣本易夾雜,提取速率快;溶劑消融感化強;提取液pH值能夠調理,合用規模廣;提取的同時兼脫卵白和脫脂;待測物在樣本提取液中平均散布,可只移取局部上清液或濾液停止闡發,無需
頻頻提取將待測物全數轉出。
1. 2 污染
污染行將待測物與提取液中的樣本攪擾雜質分手。前處置中污染的任務量最大,但一個具備壯大分手效力或高挑選性檢測才能的測定體系可大大降落對污染的請求。獸藥殘留闡發中經常利用的污染方式是液- 液分派和固相萃取。
1. 2. 1 液- 液分派
液- 液分派屬典范的污染手腕。等體積的分派體系中溶質分派均衡后消融在非極性或極性較弱的溶劑中溶質的百分比稱為p值,操縱p值能夠挑選萃取體系、計較萃取次數和抽出率。經由進程調理溶液的pH值、極性、離子對構成等手腕挑選性地轉變待測物的p值是經常利用的污染方式,如構造中磺胺類藥物的污染[ 1 ]。大都獸藥屬無機酸或無機堿類化合物,離子對萃取法在獸藥殘留闡發中有首要代價。
1. 2. 2 固相萃取
固相萃取作為污染手腕,其根基道理與開放式柱色譜不異。固相萃取中樣本與微細顆粒填料(Φ70～150μm)打仗面積大,污染速率快,分手效力高;操縱簡潔,溶劑用量少,收受接管率高。以是最近幾年來固相萃取成長很快。吸附層析經常利用的填料如硅膠、氧化鋁,因其吸附機能受本身和樣品的含水量影響很大,需嚴酷節制。大孔樹脂(聚苯乙烯)為一種反相吸附劑,可間接污染含水試樣。分派層析中經常利用的反相填料為鍵合有十八烷基(C18)或辛烷基(C8)的硅膠,是今朝操縱最遍及的固相萃取手藝。
基質固相分手(matrixsolid - phasedispersion, MSPD ) 是1989年由美國Louisiana州立大學的S A Barker傳授初次提出并賜與實際詮釋的一種極新的固相萃取手藝。其根基操縱是將樣本間接與適當反相填料(C18或C8)研磨、混勻,制成半固態裝柱、淋洗。作為樣本污染手藝,它具備間接處置樣本的長處,疾速的分手進程和較高的分手效力,出格適合于多殘留組分疾速分手和闡發主動化。MSPD的簡略操縱中稀釋了傳統的樣本前處置中所需的樣本勻化、構造細胞裂解、提取、污染等進程,但防止了樣本勻化、轉溶、乳化、稀釋和靜電形成的待測物喪失;污染后的樣品可間接停止測定,測定速率快(十幾分鐘) ,所用無機溶劑量削減(幾十毫升) 。
1. 2. 3 薄層色譜( TLC)
TLC作為樣本污染手腕具備直觀、速率快、樣本容量大和分手效力高(顆粒Φ30～50 μm)等長處。但對紫外- 可見區無領受的待測物卻難以定位,有些待測物可經由進程規范品顯色來處置。
1. 3 稀釋
稀釋是待測物富集或轉溶的經常利用方式。前處置中以稀釋進程待測物喪失最大。應防止樣品液被間接蒸干,不然待測物能夠附著于器皿上或與樣本基質連系使收受接管率降落,高極性待測物如磺胺類藥物較為嚴峻。
1. 4 衍生化
衍生化進步檢測的活絡度和挑選性已成為殘留闡發中衍生化的最首要目標,如給待測物毗連強電負性基團以適于氣相色譜的電子捕獲檢測器檢測、HPLC的紫外或熒光衍生化等。
HPLC衍生化分為柱前和柱后衍生化。柱后衍生化須要特地的反映裝配(高壓泵、夾雜及反映管道) ,待測物從色譜柱流出后與衍生化試劑反映,再進入檢測器。其凸起長處是在線反映,靜態檢測,無需反映停止完整,不影響現有的分手前提;首要缺少是衍生化試劑能夠對檢測有攪擾,對活動相亦無限定。
2 測定方式
2. 1 氣相色譜法
氣相色譜法有很多高活絡、通用性或專注性強的檢測器供選用,如氫焰離子化檢測器( FID) 、氮磷檢測器(NPD)等,檢測限普通為μg/kg級。可是大大都獸藥極性或沸點偏高,需煩瑣的衍生化步驟,限定了GC的操縱。以是, 20 世紀80 年月后HPLC的成長速率跨越GC,相稱數目的獸藥接納或改用HPLC停止闡發,如氯霉素、磺胺類藥物等。
2. 2 高效液相色譜法
幾近一切的化合物包含高極性/離子型待測物和大份子物資都可用HPLC停止測定。HPLC的分手機制與慣例柱色譜不異,但填料加倍邃密(Φ5～10μm) ,可反復進樣,闡發速率快。HPLC至今仍缺少可知足獸藥殘留闡發請求的通用型檢測器。紫外檢測器(UVD)最進步,其次是熒光檢測器和電化學檢測器。光二極管陣列檢測器是近十年來HPLC最首要的沖破。DAD可同時領受全部光譜區的信息,在色譜峰流出同時能停止每一個剎時的靜態光譜掃描并疾速收羅旌旗燈號,經計較機處置后獲得色譜- 光譜的三維圖譜,信息量大大增添。一次進樣可獲得每一個組分峰的定量、定性和純度信息, 活絡度亦較著進步。大局部抗生素在高于230 nm的光譜區無領受,而在低于230 nm的紫外區很多樣本基質和活動相發生攪擾,需衍生化后測定,限定了紫外檢測器的操縱。旋光檢測有以下特色:(1)挑選性高,樣本僅需簡略提取便可;(2)活絡度高,操縱He- Ne激光作光源,活絡度可達5～10μg程度;(3)可同時獲得流出組分的比旋度,用以定性。今朝,該方式已用于紅霉素、慶大霉素、羧芐青霉素和吩羧青霉素殘留的測定。
2. 3 高效薄層色譜(HPTLC)
HPTLC的呈現使TLC進入了回復期間,現已成為僅次于HPLC和GC的殘留闡發方式。HPTLC的雀斑原位掃描定量、定性和高效分手資料(Φ3～10μm) 。轉變了慣例TLC在活絡度和重現性方面的缺少,但堅持了TLC的簡潔、疾速和樣品容量大的長處,可操縱正相或反相板,分辯率幾近與HPLC相稱。HPTLC在獸藥殘留的疾速挑選性檢測方面操縱普遍。
2. 4 超臨界流體色譜( SFC)
SFC可填補GC和HPLC的缺少,但不能夠代替兩者。SFC最大長處是能夠便利地毗連各類活絡的檢測器(MS, ECD等) ,如豬構造中磺胺類藥物等抗菌素殘留的SFC -MS闡發。
2. 5 毛細管地區電泳(CZE)
CZE是20世紀90 年月以來研討最活潑的闡發手藝之一。1989年起頭有商品出賣。CZE差別于傳統的凝膠電泳手藝, CZE操縱直徑僅25～50μm的毛細管而不必載體,待測組分在高壓(20～30 kV)下泳動,截面積小,熱量和泳速平均。以是, CZE兼有高壓電泳的高速、高分辯和HPLC矯捷、高效的長處,柱效高達106塔板/m。向電解質中插手超臨界膠束濃度的外表活性劑,如十二烷基硫酸鈉( SDS) ,即為毛細管膠束電動色譜( cap illarymi - cellarelectrokineticchromatography,CMEC) ,分手規模可擴大至中性或兩性份子,分手效力亦進一步進步。CZE將在簡化樣本前處置、多殘留闡發和闡發主動化方面闡揚首要感化。今朝CZE的首要題目是樣品量太小,限定了檢測的活絡度。CZE - MS能夠是最好的處置方式。
2. 6 聯用手藝
各類闡發手藝聯用是古代獸藥殘留闡發甚至全部闡發化學方式上的成長特色。計較機的操縱加快了這一趨向。聯用手藝可取長補短,普通兼分手、定量和定性(份子布局信息)于一體,因此出格合用于確證性闡發。罕見的聯用手藝,如TLC- MS、GC - MS、LC - MS、CZE - MS、LC - NMR、SFC - MS等。
TLC - MS是最簡略的離線聯用手藝。GC - MS已相稱成熟,操縱絕對較多。但這些聯用儀價錢高貴,遠不如HPLC或GC那樣進步。MS無疑可作為HPLC的通用型檢測器。操縱微型柱(15 ×0. 3 cmid)和適合的接口手藝,如熱噴霧( TSP) 、微粒束( PB)等處置了LC與MS的毗連題目;操縱軟電離手藝,如快原子轟擊( FAB) 、場解吸( FD)等處置了難氣化物資的離子化題目。LC - MS此刻已進入適用階段,其活絡度較熒光檢測器高1個數目級,能便利地對ng級的獸藥殘留組分停止檢測與布局確證。
